МУК 4. 2. 1. 89. 0- 0. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4. 2. 1. 89. 0- 0.
Дата введения: с момента утверждения. РАЗРАБОТАНЫ. Центральным научно- исследовательским институтом эпидемиологии.
Нию чувствительности к антибиотикам, а также На. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.
Также при применении модифицированных методик Haemophilus. Фирменные диски Sensi-Disc – это 6-мм диски, подготовленные путем. Для выполнения тестирования чувствительности с диффузией дисков в.
Н. А. Семина, С. В. Сидоренко); Государственным научным центром по. С. П. Резван, С. А. Грудинина); Научно- исследовательским. Смоленской государственной. Л. С. Страчунский, О.
У. Стецюк, Р. С. Козлов. М. В. Эйдельштейн); Кафедрой микробиологии и химиотерапии Российской. Е. А. Ведьмина. Л. Г. Столярова, И. В. Власова); Федеральной службой по надзору в сфере. З. С. Середа). 2.
УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В. ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской. Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской. Федерации Г. Г. Онищенко 4 марта 2. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН. .
Заместителем Главного государственного. СССР В. Е. Ковшило 1.
В настоящих. методических указаниях изложены стандартные методы определения. Методические. указания предназначены для применения в микробиологических. Однако определение чувствительности. АБП показано далеко не во всех. Определение показаний для исследования чувствительности. АБП является обязанностью врача- бактериолога.
Определять. чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры. Обязательному. исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы. В остальных случаях оценке чувствительности должна. Определение. чувствительности выделенного штамма микроорганизма показано, если.
АБП не может быть предсказан на. Практически важной задачей является. АБП у. природно- чувствительных к ним микроорганизмов. Подтверждение. природной чувствительности или резистентности микроорганизма к АБП. Исследованию по оценке.
При обнаружении на. Прямое определение. Граму, причем исследование следует. Следует уделять особое.
У. микроорганизмов, проявляющих универсальную чувствительность к. АБП, т. е. Результаты, полученные в данном.
В зависимости от. Разновидностью метода.
АБП, соответствующих. МПК (см. Этот принцип исследования. Диффузионные методы. АБП из носителя в. АБП превосходит МПК. В. настоящее время существуют две основные модификации диффузионного. Е- тест. В. диско- диффузионном методе в качестве носителя АБП используют.
Образование зоны подавления роста происходит в. АБП из носителя в питательную среду.
В. определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста. МПК. Однако диско- диффузионный метод. МПК, а результатом. Е- тест представляет собой. АБП (от минимальных до максимальных). Подавление роста. Е- теста происходит только в той зоне.
АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при. Значения концентрации. АБП в каждом участке носителя типографским способом нанесены на. Е- теста. Величину. МПК учитывают в том месте, где граница зоны подавления роста. Детальные инструкции по определению. Е- тестов прилагаются.
Основные этапы проведения тестирования. Оценка. антибиотикочувствительности, независимо от конкретного метода.
Диффузионные методы. Е- теста на плотную.
Приготовление питательных сред для определения. Для оценки. чувствительности используют специально предназначенные для этой. Российской Федерации в. Внутрилабораторный контроль. Губергриц Наталья Донецк.
Российской Федерации в установленном порядке. Вид питательной среды для. Выбранную питательную. После автоклавирования питательную среду сразу же.
Петри, или (если. Чашки оставляют при. Приготовленные указанным. Петри предпочтительнее использовать немедленно. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов.
Общим и принципиально. Практически наиболее приемлемым. Оптическая плотность. Контроль. оптической плотности суспензии можно также осуществлять.
Существуют коммерчески. Бактериальную. суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой. Приготовление инокулюма из агаровой культуры. Для приготовления.
Отбирают несколько. Петлей переносят незначительное. Мак. Фарланда. Инокулюм. Приготовление инокулюма из бульонной культуры. При определении. чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными. Для этого отбирают.
Инкубируют при 3. Через 5- 6 ч. инкубации плотность микробной суспензии приблизительно. Мак. Фарланду. путем добавления стерильного бульона или физиологического. Стандарт Мак. Фарланда. Приготовление стандарта 0,5 по Мак. Фарланду. К. 0,5 мл раствора Ва.
Сl в концентрации 0,0. Ва. Сl. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и. Хранить пробирки с. Перед использованием. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из. Стандарт мутности. Приготовление. растворов АБП для методов серийных разведений.
Общим и крайне важным. АБП. Для. взвешивания субстанций необходимо использовать электронные. Основные растворы АБП. Навески АБП для. приготовления базовых растворов готовят с учетом их активности. Поэтому готовят близкую. АБП; - расчетная (теоретическая) навеска. АБП; - объем растворителя для растворения.
В. связи с тем, что АБП существенно различаются по растворимости, в. В тех случаях когда растворители и разбавители. АБП необходимо. использовать минимально возможное количество растворителя.
Отличные от воды. АБП приведены в табл. Оптимальными условиями для хранения основных. АБП является температура - 6. При этом необходимо иметь в виду, что основные. АБП могут терять активность и в более. После извлечения из.
Размороженные основные растворы должны быть. Для приготовления рабочих растворов.
Из рабочих растворов. АБП. При расчетах за основу берется.
АБП в питательной среде равная 1,0 мкг/мл. При этом реальные концентрации растворов должны учитывать. АБП при приготовлении чашек с плотной. Диапазон двукратных серийных.
АБП зависит от вида тестируемого микроорганизма. АБП и целей исследования. Метод серийных разведений в бульоне. Различают два основных. Область применения макрометода из- за низкой. Макрометод. Процедура.
Тестирование проводят в. АБП с конечной концентрацией.
Концентрацию рабочего раствора рассчитывают исходя из. Тщательно перемешивают и новым стерильным наконечником.
АБП в бульоне во вторую пробирку. Эту процедуру повторяют. Из. последней пробирки 0,5 мл бульона удаляют. Таким образом, получают. АБП, концентрации которых отличаются в.
Одновременно готовят дополнительные. АБП для тестирования контрольных штаммов.
Алгоритм определения чувствительности одной исследуемой. АБП методом разведений в жидкой питательной среде. Приготовление инокулюма и инокуляция.
Для инокуляции используют. Мак. Фарланда, разведенную в 1.
КОЕ/мл. По 0,5 мл инокулюма. АБП, и в одну пробирку с 0,5 мл питательного бульона без. Конечная концентрация. Инокулюм должен быть внесен в. АБП не позднее 1.
Инкубация. Пробирки закрывают. Рост культуры в присутствии АБП сравнивают с референтной. МПК определяют по наименьшей. АБП, которая подавляет видимый рост. Микрометод. Преимуществами.
Тестирование. проводят при величине конечного объема 0,2 мл и меньше, что. После внесения. рабочих растворов антибиотиков в лунки, запаянные в полиэтилен. Повторное замораживание- оттаивание не. Для проведения. исследования планшеты после извлечения из холодильника выдерживают. За МПК. принимают минимальную концентрацию, обеспечивающую полное.
Метод серийных. микроразведений в бульоне легко поддается модификациям для. При использовании тест- систем, разрешенных. Российской Федерации в установленном порядке.
Контроль качества. При постановке методов. АБП. Необходимо также контролировать чистоту. Каждая партия тестируемых штаммов. Метод серийных разведений в агаре.
Метод серийных разведений. МПК партии штаммов (от 1. Процедура. Принцип метода. Петри с. агаром, содержащим последовательные двойные разведения.
Одновременно проводят тестирование партии клинических. АБП и контроль чистоты культуры. Приготовление серийных разведений АБПИз основного раствора. АБП готовят рабочий раствор в концентрации, в 1. Затем готовят серию двукратных разведений рабочего. Таким образом, концентрация АБП в каждом последующем.
Для. приготовления серии разведений используют любые стерильные. Питательная среда. Сухую агаризованную. После автоклавирования колбы с. Затем среду. тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри, толщина слоя.
Вторым способом. приготовления чашек Петри с агаром, содержащим разведения АБП. АБП. непосредственно в чашке Петри. Для приготовления стандартных. АБП. добавить 1. 8 мл разогретого до 5.
Чашки. предварительно маркируют с указанием препарата и его концентрации. Перемешивание производят на горизонтальной. После приготовления чашек агар должен затвердеть. Нельзя резко передвигать, переносить. Параллельно с чашками.
Петри, содержащими растворы антибиотиков, для контроля роста. Петри без антибиотиков. Чашки оставляют при комнатной. Приготовленные указанным. Петри предпочтительнее использовать немедленно. При этом необходимо иметь в виду, что. В этой связи стабильность.
Петри. целесообразно устанавливать экспериментально с использованием. Приготовление инокулюма и инокуляция. Конечная посевная доза. КОЕ. Поскольку коммерческие инокуляторы или. КОЕ/мл. Такую концентрацию можно получить. Мак. Фарланду, в 1.
Полученную суспензию. Для контроля качества.
Инкубация. После инокуляции чашки. Для дифференцирования нежного роста от налета, оставшегося. Появление единственной колонии на чашке с концентрацией. МПК, можно не учитывать. Результат. оценки антибиотикочувствительности имеет смысл учитывать только при.
Каждая партия тестируемых. Общие замечания по методам серийных разведений.
Несмотря на то что методы. Прежде всего, речь идет о необходимости. Использование тест- систем. Весьма экономичным и простым в. К качеству питательных сред. Приготовление чашек Петри.
Важным моментом при определении чувствительности ДДМ. Она должна составлять. Перед заполнением расплавленной. Петри устанавливают на строго горизонтальную. Хранить чашки. можно запаянными в полиэтиленовые пакеты при 4- 8 . При использовании свежеприготовленных чашек или чашек после. Перед инокуляцией необходимо проконтролировать.
Диски с антибиотиками. Для определения. чувствительности ДДМ следует использовать только. Изготовление дисков с АБП. Это связано с. жесткими требованиями к исходным материалам (субстанциям АБП. Для получения правильных. ДДМ необходимо строго.
Долговременное хранение. АБП осуществляют в герметичной упаковке в морозильной.